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    1. 文章詳情

      IgM 類小鼠單克隆抗體純化試劑盒使用說明書

      日期:2022-07-07 10:00
      瀏覽次數:944
      摘要:試劑原理: 本試劑盒利用不同蛋白需要的沉淀試劑和沉淀條件不同,通過大量實驗分析 驗證而得到的一個與傳統沉淀純化相比有較大不同的精細的具有高活性、高 產率、快速以及良好重復性的單克隆抗體的純化方法。
      試劑特點:
      本試劑盒特點在于純化操作的簡單化、所得抗體保持高活性和較高純度。實
      驗表明,本試劑盒可以得到 90%以上純度的抗體;并且由于配方考究,抗體
      在純化過程中幾乎沒有損傷,完全保持應有的活性;實際應用極好。 適用范圍:
      本試劑盒適用于小鼠 IgM 類單克隆抗體腹水的純化,不能用于 IgG 和 IgA 類
      單克隆抗體腹水的純化實驗,如需要可選擇本公司其它貨號的純化試劑,它
      能為您帶來良好的結果。 試劑組成:
      試劑名稱 數量 試劑名稱 數量
      純化液 A 50ml 純化液 E 5ML
      純化液 B 50mL 透析試劑(粘稠或固體) 配 8L 量
      純化液 C 50mL 透析袋 4 份
      純化液 D 50mL 說明書 1 份
      純化步驟:
      1、從冰箱中取出試劑盒放置室溫恢復溫度 30 分,期間可將單克隆
      抗體腹水從冰箱中取出,室溫避光復溫 15 分鐘,隨后用自來水
      邊沖邊搖勻快速解凍。
      2、將化開的單克隆抗體腹水 8000-12000RPM 室溫 離心 10 分鐘。
      3、先吸棄*上面浮沫和油脂,然后將上清轉出到另一個干凈容器或
      離心管;按每 1 毫升單克隆抗體腹水加入純化液 A(加前確定沒
      有試劑析出,如有析出搖晃溶解即可) 1 毫升(必須**),室
      溫避光倒轉 30 分。
      4、8000RPM 室溫離心 10-20 分鐘,沉淀用純化液 B 溶解到原單克隆
      抗體腹水 1/2 體積,再按此體積每 1 毫升加入純化液 C (加前確
      定沒有試劑析出,如有析出搖晃溶解即可)1 毫升((必須**),
      室溫避光倒轉 10 分鐘。
      5、8000RPM 室溫離心 10-20 分鐘,棄沉淀收集上清;每 1 毫升上
      清液加純化液 D(加前確定沒有試劑析出,如有析出搖晃溶解即
      可) 1 毫升(必須**),室溫避光倒轉 20 分鐘。
      6、8000RPM 室溫離心 10-20 分鐘,收集沉淀用純化液 B 收集溶解沉
      淀到原單克隆抗體腹水體積的 1/3。透析袋用純水浸泡 5 分鐘,
      然后用手揉捏數次,接純水沖洗干凈,抗體放入扎好。透析液用
      純水溶解透析試劑到 8L(也可先溶解到 400ML,用時 20X 稀釋),
      將要透析的抗體袋子放入??贵w體積:透析液體積=1:100,4℃
      透析過夜。收集透析后抗體。
      7、以透析后抗體體積:純化液 E 的體積=9:1 的比例加入純化液 E
      搖勻(也就是 9 體積抗體加 1 體積純化液 E),靜置 5min。8000RPM
      室溫離心 10 分鐘,棄沉淀收集上清即為純化好的抗體。
      8、將純化好的抗體放入用透析夾或繩扎緊??贵w體積:透析液體積
      =1:50 以上;4℃透析,中間換液三次,透析總時間不超過 24 小
      時。然后 8000RPM 室溫離心 10 分鐘,收集上清測蛋白濃度并調
      控在 5mg/ml 左右*后加 10/萬 NaN3 防腐并**過濾-20℃備用。 注意事項:
      1、溶血嚴重和腐敗的腹水不得用于純化。
      2、離心溫度不要超過 37℃。
      3、操作和量取試劑要細致精準,否則影響純度。
      4、不攪拌透析每次靜置透析時間不得低于 4 小時。
      5、如覺得透析太慢可以選擇超濾管。
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